馬斯亮藍(lán)G250這么操作更準(zhǔn)確
更新時間：2022-07-12 點擊次數(shù)：1864次馬斯亮藍(lán)G250這么操作更準(zhǔn)確
考馬斯亮藍(lán)G250屬于三苯甲烷類染料，有G250和R250兩種，可與蛋白質(zhì)形成較強(qiáng)的非共價復(fù)合體，白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍(lán)色。考馬斯亮藍(lán)G250是Bradford法蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分，考馬斯亮藍(lán)R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質(zhì)條帶的染色。
性狀：藍(lán)色至深紫色粉末
CAS： 6104-58-1
分子式：C47H48N3O7S2Na；分子量：854kD
溶解性：溶于熱水（50mg/ml），乙醇（40mg/ml）
純度：≥90%
Bradford法測蛋白濃度試驗過程
1) 染液的配制：
將100mg的G-250溶解于50mL 95％的乙醇中，加入85％(w/V)的磷酸l00mL，加水定容至1L。
2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
在7個試管中分別加入含0、10、20、30、40、50、60ug標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，用水補(bǔ)足到60ul，加3mL染色液，混勻后室溫放置15分鐘，至595nm處比色測定。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，A595的值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3) 測定：
取未知濃度的樣品60ul，同上測定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量。
該方法反應(yīng)快、操作簡便、消耗樣品少，但不同蛋白質(zhì)間的差異大，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，顯色受時間和溫度影響?？捡R斯亮藍(lán)染色能力強(qiáng)，特別要注意比色杯的清洗。較高濃度的去污劑(Triton X-100，SDS等)、尿素和硫酸銨對測定有干擾。
染色方法：
1）考馬斯亮藍(lán)G250染色液的配制
將0.2g G250溶于100ml水中（需要加熱至50°C促進(jìn)溶解）。冷卻后，加入100ml 2N H2S04。室溫放置3h-過夜，然后濾紙除雜。過濾后的溶液，小心加入22.2ml 10N KOH，然后加入28.7g TCA。混勻后室溫放置> 3h，再過濾除雜從而獲得琥珀般的棕色溶液，不含藍(lán)色沉淀。
2）染色只需將膠*浸在此染色液中，約15 min后條帶就會顯示出來。幾小時后染色條帶的亮度和靈敏度會進(jìn)一步加強(qiáng)。
3）染色液室溫約穩(wěn)定存放2-3周。
保存：室溫保存
備注：本公司所有產(chǎn)品僅限科研使用
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